Interprétation :
Nous remarquons que la vitesse d'action de la glucose oxydase augmente avec la concentration de glucose jusqu'à atteindre un palier où elle se stabilise.
En effet, plus la concentration de glucose est élevée, plus la probabilité qu'un complexe enzyme-substrat (GOD-glucose) se forme rapidement est importante. Lorsque le palier est atteint, la vitesse d'action de l'enzyme est maximale. Ceci est du au fait que la concentration de substrat est suffisante pour saturer l'intégralité des sites actifs des enzymes présentes dans la solution.
Matériel :
- Système EXAO avec sonde à dioxygène
- Agitateur magnétique
- Bécher (25 mL) ou bioréacteur
- Pipette 10 mL + propipette ou seringue 10 mL
- Seringue 1 mL
- Solution de glucose oxydase : 1 pointe de scalpel dans 100 mL d'eau distillée (tester avec C5 ou C6 et rajouter de la GOD si nécessaire)
- Solutions de glucose de différentes concentrations : préparer 500 mL de solution de glucose à 0.5 mol/L (45 g / 500 mL) puis effectuer des dilutions.
Protocole :
- Introduire 10 mL de la solution C1 dans le bécher.
- Lancer l'agitation et introduire la sonde oxymétrique dans la solution.
- Lancer la mesure.
- A t = 30s injecter 0.3 mL de solution de GOD.
- Une fois l'acquisition terminée, stocker la courbe obtenue.
- Bien rincer le bécher, la pipette et la sonde à dioxygène à l'eau distillée.
- Effectuer la même opération pour les autres solutions de glucose (C2 à C6).
- Ajuster l'échelle du graphe.
- Utiliser la fonction "droite de régression" du logiciel sur la partie pertinente des courbes pour connaître la vitesse d'action de la GOD pour chaque solution de glucose.
- Annoter la courbe et mettre un titre.
- Représenter grahiquement les résultats obtenus : Vitesse en fonction de la concentration ("Page" --> "Ajouter Page..." --> cocher "Nouvel ensemble de données et graphe")
- Ranger le poste de travail.
Principe :
La glucose-oxydase (GOD) est une enzyme qui catalyse l'oxydation du glucose en acide gluconique selon l'équilibre :
C6H12O6 + H2O + O2 → C6H12O7 + H2O2
La sonde oxymétrique mesure les variations de la concentration de dioxygène du milieu donc la vitesse de cette consommation. Cette vitesse est l'indicateur de la vitesse de la réaction d'oxydation.
Pour évaluer l'influence de la concentration en substrat sur la vitesse d'action de la GOD nous disposons de solutions de glucose de différentes concentrations :
C1 = 0.005 mol/L
C2 = 0.01 mol/L
C3 = 0.025 mol/L
C4 = 0.05 mol/L
C5 = 0.1 mol/L
C6 = 0.5 mol/L
